옥수수 아플라톡신 측정 방법
아플라톡신 (Aflatoxin) 은 디푸라닐 링과 쿠마린 (oxanaphthoquinone) 으로 구성된 화합물이다. 아스퍼길루스 플라버스 (Aspergillus flavus) 와 아스퍼길루스 기생충 (Aspergillus parasiticus) 과 같은 균에서 생성된다.,분자 중량은 312-346이고 녹는점은 200-300 °C입니다. 안정적이고 고온 내성이있는 특성을 가지고 있으며 장파 자외선에서 형광을 일으킬 수 있습니다.B1로 나뉘어 있습니다., B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM 및 독성 알코올은 다른 형광 색상, RF 값 및 구조에 따라
AFT는 물, 에탄, 에테르 및 석유 에테르에 용해되지 않지만 메탄올, 에탄올, 클로로폼, 아세토니트릴 및 디메틸포르마마이드와 같은 유기 용매에 쉽게 용해됩니다.AFT는 pH 1-3의 산성 용매에서 약간 분해 할 수 있습니다., pH 9-10의 용액에서 빠르게 분해되고 분해됩니다. 알칼리에 노출되면 빠르게 분해되며, pH 9-10의 알칼리 용액에서 거의 독성이없는 소금으로 분해됩니다.산성 상태에서는 감소할 수 있습니다..
실험의 목적
아플라톡신은 곰팡이에서 생성되는 일부 고독성 발암 물질을 의미합니다. 단기적으로 높은 복용량 (1mg/kg 체중) 을 섭취하면 급성 중독이 발생할 수 있습니다.발열과 같은 간 기능 장애 증상장기간 낮은 복용량 (20 미크로그램/체중 kg) 에 노출되면 간암, 위암 및 기타 질병의 위험이 크게 증가할 수 있습니다.작물과 식품에 널리 존재하고 인간과 동물에게 큰 해를 끼치기 때문에, 신속하고 정확한 검출 방법을 구축하는 것은 식품 안전과 공중 보건을 보장하는 데 매우 중요합니다.
이 실험의 목적은 고분기 효소 결합 면역 흡수 검사 (ELISA) 의 원리를 사용하는 것입니다. 즉 효소 결합 면역 흡수 검사 (ELISA)표본에 있는 아플라톡신 B1의 함량을 제한하고 정량화하기 위해, 식품 오염 위험 평가에 대한 과학적 근거를 제공합니다.
실험용 장비
1 ST-2000A 미코톡신 분석기
2 옥수수, 동화기, 질소 건조장치, 오시레이터, 원심장, 점진 피펫, 균형 (감각도 0.01g), 마이크로 피펫, 메탄올, n-헥산, 클로로폼 또는 디클로로메탄 반응기
실험 절차
1 실험 에 사용 된 장비 가 깨끗 하고 건조 하고 오염 이 없는지 확인 하십시오
2 샘플 추출 용액을 준비하기 위해 메탄올과 디온화 된 물을 7:3 비율로 혼합합니다.
2g의 분쇄 된 옥수수 표본을 50ml의 원심 분기 튜브에 넣어 샘플 추출 용액 5ml를 첨가하고 10분 동안 4000 rpm의 실내 온도에서 5분 동안 흔들고 그 후0을 가져가.5ml의 수퍼나텐트와 0.5ml의 디온화 된 물을 첨가합니다. 잘 섞어
4 4 °C의 냉동 환경에서 필요한 반응 물질을 제거하고 30 분 동안 실내 온도에서 균형을 유지시켜 잘 흔들고 필요한 수의 마이크로 플레이트와 프레임을 제거합니다.그리고 농축 된 세탁 용액을 20 배 가량 이온화 된 물로 희석하여 작동 세탁 용액을 만들 수 있습니다..
5 샘플과 표준의 대응 미세포에 순서대로 번호를 붙이고, 각 샘플과 표준에 대해 2개의 평행 우물을 만들고, 표준 우물과 샘플 우물의 위치를 기록한다.각각의 미세포에 표준 또는 샘플을 50μl/well로 추가합니다., 그 다음 효소 표시기 50 μ l/well를 첨가하고, 그 다음 항체 작업 용액 50 μ l/well을 첨가합니다. 덮개 막으로 판을 봉인하고, 5 초 동안 부드럽게 흔들고, 잘 섞습니다.25°C에서 30분 동안 반응한다.
6 덮개 필름을 제거하고 구멍 안의 액체를 흔들고 구멍당 250 μ l의 작동 세척제로 5번 세탁하고 세탁 사이를 30초 간격으로 세탁합니다.흡수용 종이를 사용하여 건조하십시오.
7 각 우물에 기판 용액 A (50 μ l) 을 첨가하고 그 다음 기판 용액 B (50 μ l) 을 첨가합니다. 5초 동안 흔들고 잘 섞습니다. 25°C에서 어두운 곳에서 15분 동안 색칠합니다.
각 웅덩이에 50μl의 종식 용액을 첨가하고, 부드럽게 흔들고 반응 종료까지 잘 섞습니다.
9 아플라톡신 분석기를 사용하여 450nm에서 각 웅덩이의 흡수 값을 측정합니다 (두 개의 파장 450/630nm가 권장됩니다).반응이 종료된 후 10분 이내에 측정이 완료되어야 합니다.
10 계기는 측정을 완료하고 자동으로 결과를 제공합니다.
실험 결과
테스트 후 샘플의 아프라토킨 함량은 약 0.19ug/kg이며, 이는 GB 2761-2017 "식품 내 곰팡이 독소 제한에 대한 국가 식품 안전 표준"을 충족합니다.